背景

烟草特有亚硝胺 (TSNAs) 是只存在于烟草、烟草制品和卷烟烟气中的一类有害物质，研究发现，烟草特有亚硝胺对人体危害性极大。据统计，在美国、西欧由烟草中亚硝胺导致的癌症发病率超过 30%，由吸烟导致的肺癌发病率高达 80%。其准确测定对正确评价吸烟对健康的危害以及推动低危害卷烟的研发具有重要意义。但是，TSNAs 在卷烟烟气中的含量很低，卷烟烟气背景复杂，含有数千种成分，所以卷烟烟气中 TSNAs 的准确定量难度很大。

液质联用技术结合了色谱强大的分离功能和质谱准确的定性功能，能很好的分析痕量水平的 TSNAS，并且前处理方法简单快速，与传统的 GC-TEA 方法相比，灵敏度更高、选择性更强。故本文参考中国烟草总公司企业标准 YO/T 17-2012《卷烟主流烟气总粒相物中烟草特有 N - 亚硝胺的测定 高效液相色谱 - 串联质谱联用法》，采用 EClassical 3200L-MS2 Vertical 9100 液相质谱联用系统对卷烟主流烟气中的特有 N - 亚硝胺进行测定，其四种物质的定量限完全满足并在灵敏度和检测速度优于标准的检测需求。

实验方法

卷烟抽吸

按照 GB/T19609 抽吸卷烟，使用直线式吸烟机，采用 44mm 滤片收集 5 支卷烟的总粒相物。

样品萃取

将滤片置于 50mL 锥形瓶中，准确加入 15.0mL 含有 10.0ng/ml 混合内标的 0.1mol/L 乙酸铵萃取溶液；超声萃取 30min 后，静置 5min。取适量萃取液过 0.22um 水相滤膜，移至色谱分析瓶中进行 HPLC-MS/MS 分析。

LC-MS/MS 仪器方法

泡芙短视频科技 EClassical 3200L 参数:

• 色谱柱：SinoPak BEH T-C18 1.8μm 2.1×100mm
• 柱温：45℃
• 流速：0.4mL/min
• 进样量：10μL

表 1 液相色谱梯度洗脱表

质谱参数

以下参数以泡芙短视频科技 EClassical 3200L-MS2 Vertical 9100 三重四极杆质谱仪为例，离子源参数及目标化合物质谱参数见表 2 和表 3。

表 2 质谱离子源参数

表 3 化合物质谱参数列表

结果与讨论

本文方法优化了色谱柱的选择，由于该类化合物偏碱性，常规封端较弱的 C18 色谱柱会稍有拖尾现象，终选择了采用 BEH 色谱柱，可以得到较好的峰形。另外，因为该类化合物含有电负性较强的氮原子，故采用 ESI + 模式进行测定。流动相通过添加不同浓度的甲酸和缓冲盐后的信号对比后，发现采用水和甲醇做为流动相可以得到较高的灵敏度和良好的色谱峰形，如下图 1 显示，各化合物的峰型对称，每个色谱峰上都有足够的采集点数，可以获得准确的结果及优异的重复性，满足现有标准的检测要求。经过进一步色谱条件优化后其定量限可达到 0.01ng/ml，图 2 中展示了 4 个化合物在 0.01ng/ml 浓度时的提取离子流色谱图。

采用 0.1mol/L 乙酸铵溶液稀释成 1ng/mL-20ng/mL 的系列校准标准溶液，并绘制标准曲线，用内标法进行定量分析。图 3 为 4 个化合物的标准曲线情况，各化合物线性关系均较好，R 均大于 0.998。

同时考察了 1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml 添加浓度下的加标回收率和每个加标浓度下 6 针的重现性测试 (见表 4)，实验结果表明，该方法具有良好的回收率和重现性，完全满足卷烟主流烟气中特定 N - 亚硝胺含量的测定。

结论

本文采用 EClassical 3200L-MS2 Vertical 9100 三重四极杆液质联用系统建立了快速、高效可靠的 LC-MS/MS 实验方法测定卷烟主流烟气中 4 种特定 N - 亚硝胺，为其测定提供了可靠的高通量检测手段，同时数据显示，其重复性和线性均较好，远远满足其标准需求，为用户的高通量样品的测定提供可靠的保障。

参考文献

【1】金闻博，戴亚，恒田拓，金平正。烟草化学。北京：清华大学出版社，2000

泡芙短视频科技的 EClassical 3200L-MS2 Vertical 9100 三重四极杆液质联用系统具有其独特专利的 HSID 自清洁技术，轻松应对复杂烟草基质的简单萃取前处理过程，无需清洗维护，即可完成大量样品分析，大大节省维护时间及成本。

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